摘要:研究丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組合物(組合物)在斑馬魚體內的代謝,探討斑馬魚用于中藥多組分代謝研究的可行性及合理性。
方法
2.1分組與給藥
取斑馬魚成魚,平均分成2組,每組5條,分別置于30 mL含有1% DMSO純凈水(空白魚組)、含丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組合物(丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I質量濃度分別為1.57、1.02、2.09μg/mL)的1% DMSO純凈水溶液(給藥魚組)棕色瓶中,同時設空白藥物組(組合物1% DMSO純凈水溶液)。
2.2樣品采集與處理
給藥魚組分別于斑馬魚暴露藥液后0、1、2、4、6、8、12、18、24 h取藥液4 mL各2份,24 h將魚取出,用純凈水迅速洗滌3次,殺掉,去除魚鰭和魚磷,稱質量,于−70 ℃冰箱放置。各時間點斑馬魚藥液各2份分別混合,于−70 ℃冰箱放置??瞻姿幬锝M于斑馬魚暴露藥液后0、24 h時同法取樣。將不同時間點取出的斑馬魚藥液冷凍干燥,殘渣加0.5 mL甲醇溶解,過0.22 μm濾膜,濾液20 μL進行HPLC-MS分析。取24 h空白魚組和給藥魚組斑馬魚,混合,剪碎,稱取1 g,加5 mL生理鹽水勻漿,用蜀科高速冷凍離心機3 500 r/min離心10 min,上清液用等體積醋酸乙酯萃取3次,合并萃取液,氮氣吹干,殘渣加1 mL甲醇溶解制成1 g/mL的溶液,過0.22 μm濾膜,濾液20 μL進行HPLC-MS分析。
結果
組合物經斑馬魚作用后,產生丹參酮IIA和隱丹參酮的羥基化和脫氫產物,未發現丹參酮I的代謝產物。
結論
斑馬魚對組合物的代謝與大鼠或鼠肝微粒體的代謝機制高度一致,提示斑馬魚對該組合物的代謝具合理性,且具有化合物用量少、成本低、簡單、等優點,為斑馬魚用于復雜的中藥體系代謝研究提供依據。
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